人正常結腸上皮細胞；NCM460

細胞英文(簡稱）：NCM460

細胞名稱：人正常結腸上皮細胞；NCM460

背景資料

收到細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)是否正常，細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。 

細胞來源：incell

代次：P3

規(guī)格：T25

細胞數(shù)：1x10^6 cells

組織來源：結腸上皮

人正常結腸上皮細胞；NCM460形態(tài)：貼壁

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

培養(yǎng)條件：1640+10% FBS；37℃，5% CO2    

傳代方法：*建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

動物細胞培養(yǎng),大致的步驟是這樣:

1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配制成細胞懸浮液.把細胞液放到培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)--------原代培養(yǎng).

但是,不要以為這樣就能一直無限培養(yǎng)下去.

因為人正常結腸上皮細胞；NCM460在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖,出現(xiàn)一種接觸抑制.

2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續(xù)增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細胞懸浮液,分開裝到好幾個瓶子里繼續(xù)培養(yǎng)--------傳代培養(yǎng).

1.      棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.      加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.      按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.      將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。